佟瑞欣读中学以后，开始受在戏剧学院的哥哥的影响，慢慢地喜欢上了戏剧表演。1984年，在哈尔滨读完了高中的佟瑞欣考入了武汉话剧院，1985年，他又到北京空政话剧院学习了一年。1986年夏天，佟瑞欣在家人的支持下，考取了上海戏剧学院表演系，经过3年的专业学习后，佟瑞欣被分配到了上海人艺，然后又进入了上海电影制片厂，开始了自己的演艺生涯

1990年，拍摄了由鲍芝芳执导的剧情类电影《江城奇事》，饰演江陵市话剧团青年学员“何一鸣”；同年，主演了由徐伟杰执导，郑爽、杨晓雯搭档的现代谍战剧《南岳龙蛇》。

1993年，参演了刘立立执导的琼瑶小说三部曲《梅花三弄》系列的第二部之《梅花三弄之鬼丈夫》，饰演对朋友讲义气，风趣幽默的医生。1996年，主演了以李叔同真人改编的传记作品《弘一大师》，饰演了近代音乐家、美术教育家、书法家、戏剧活动家，是中国话剧的开拓者之一的弘一大师。1998年，与巍子、江珊共同主演了长篇民族爱国主义历史剧《上海沧桑》，扮演唐家三公子唐三浦。

2000年9月，主演了改编自梁凤仪小说的以海峡两岸为题材的情感剧《无情海峡有晴天》，并且诠释了男一号英嘉杰一角。2001年12月，拍摄了由郭宝昌执导，涓子、李萍主演的现代都市剧《欲望的漩涡》；同年，主演了郭宝昌执导的，记录了富家子弟谢益亭迷上相声的历史剧《宅门逆子》，在剧中饰演痴迷于相声的富家子弟谢益亭。2003年，参演郭宝昌执导的，医药世家经历的历史剧《大宅门2》，诠释了白敬业之子，白景琦之孙，参加红军，后任百草厅经理的白占元。2004年7月，与杜志国，高兰村共同主演了古装历史剧《大清御史》，饰演左都御史钱沣。

2007年，与于小慧共同主演了农村题材的《春暖南粤》，扮演梅山乡党委书记陈伟华。2008年，主演了由林添一执导的年代家庭伦理剧《天伦劫》，并且与吕丽萍合作此剧。2009年5月，为迎接新中国成立60周年，纪念“五一”国际劳动节的到来在天津大剧院与丁建华、乔榛、濮存昕共同朗诵《红色箴言》。

2010年2月，与薛佳凝，方青卓在东方卫视大年初一海派春晚上表演小品《相亲“剩”“斗”时》；9月，与严宽共同主演了庆祝建党90周年献礼片《烽火长城》；10月，参演了由郭宝昌执导，杨幂、冯绍峰主演的改编自战国历史典故“窃符救赵”的古装战争剧《虎符传奇》，饰演韩王。

2011年5月，与张芝华、奚美娟主演家庭情感剧《儿女情更长》，并在剧中饰演童鸣的父亲童建设；10月，拍摄了由海顿执导并主演的谍战题材作品《奸细》，饰演关州军分区参谋长罗天刚。

2012年8月，与牛莉搭档，主演了讲述70、80、90后三对夫妻的婚后生活的家庭轻喜剧《宝贝》，并饰演剧中冯莹的丈夫张嘉平；10月，拍摄了纪念中国抗战胜利以及世界反法西斯战争胜利69周年的战争剧《长沙保卫战》，饰演八路军驻湘通讯处主任彭中华；11月，在佟丽娅、雷佳音主演的都市情感剧《断奶》中饰演安琪日企的法律顾问王明。

2014年，拍摄了张族权执导以爱情、婚姻为主题的都市情感剧《谎言的诱惑》。2016年3月，与刘劲共同主演了纪念红军长征胜利会师八十周年，革命历史题材的战争剧《长征大会师》，饰演了中国共产党、中国人民解放军和中华人民共和国的主要缔造者和领导人毛泽东。

2016年12月，与张凯丽在国家大剧院演绎话剧《哈姆雷特》。

2017年3月，参加上影演员剧团致敬戏剧日。

2016年10月，佟瑞欣以上海公益微电影节发起人兼创办人、上海电影表演艺术协会会长、上影演员剧团团长身份参加第二届上海公益微电影节开幕仪式，活动的初衷，是希望整个社会多一些尽自己绵薄之力的人，去帮助那些需要帮助的人，让大家一起快乐生活；希望人与人之间，无论相识与否，都应该是一幅幅相亲相爱、温暖的画面。

佟瑞欣在《长征大会师》中的毛泽东“不仅形似，更是神似”。他是圈里出了名的绝好男人（、）。

佟瑞欣在《长征大会师》中的毛泽东，不仅正面展现了革命传人的豪情壮志，又细腻而不失大气的刻画了扭转乾坤的伟人形象。佟瑞欣被称为“上海好男人儿”。他拥有生活磨难中的成长和知足。他有一套自己的“育儿经”，经常引导、鼓励他们如何健康、快乐地成长。他是个恬静而随意的人，追求一种安静的生活。